Хроматография гидрофобных взаимодействий

  • Хроматография гидрофобных взаимодействий

    Хроматография гидрофобных взаимодействий (ХГВ)
    ХГВ позволяет разделить белки на основании различий в гидрофобных свойствах. В основе процесса разделения лежит обратимое взаимодействие белка и гидрофобной поверхности хроматографической среды. Такое взаимодействие усиливается за счет применения буфера с высокой ионной силой, что делает ХГВ логичным «следующим этапом» очистки белков, осажденных сульфатом аммония или элюированных концентрированным солевым раствором в ходе ИОХ.

    Образцы в растворах высокой ионной силы (например, 1,5 M [NH4]2SO4) связываются сразу же при нанесении на колонку. Затем условия меняют, чтобы дифференциально элюировать связанные вещества. Элюция обычно проводится посредством снижения концентрации соли. Изменения проводятся поэтапно, с непрерывным снижением градиента соли. Чаще всего элюция образцов проводится посредством снижения градиента концентрации сульфата аммония. Целевой белок в процессе связывания концентрируется. Затем проводится сбор очищенного концентрированного белка.

    Выбор хроматографической среды для ХГВ
    Гидрофобность белка определить непросто. Для каждой задачи рекомендуется проводить подбор оптимальной среды с помощью комплекта для подбора HiTrap HIC Selection Kit или набора RESOURCE HIC Test kit.


    Предлагаются гидрофобные лиганды, которые различаются по степени гидрофобности:
    Повышенная гидрофобность
    бутил-S –> эфир –> изопропил –> бутил –> октил –> фенил
    Белки с высоким показателем гидрофобности прочно связываются с высокогидрофобными лигандами. Помните, что при ХГВ на избирательность может влиять не только хроматографическая матрица, но и гидрофобный лиганд.
    Если в образце присутствуют гидрофобные компоненты, начните со среды низкой гидрофобности.
    Выберите среду с оптимальным разрешением и объемом нанесения при низкой концентрации соли.

GREENVAN