Ионообменная хроматография

Ионообменная хроматография (ИОХ)
В основе ИОХ лежит разделение белков с различной величиной поверхностного заряда. Разделение проводится за счет обратимого взаимодействия между заряженными молекулами белка и хроматографической средой с противоположным зарядом. Белки связываются при нанесении в среду. Затем условия изменяются, чтобы дифференциально элюировать связанные вещества.

Такое элюирование обычно проводится посредством увеличения концентрации солей или изменением рН. Чаще всего образцы элюируются с помощью NaCl с примением градиентного элюирования. Целевой белок в процессе связывания концентрируется. Затем проводится сбор очищенного концентрированного белка. ИОХ чаще всего применяется для выделения вещества или на промежуточных этапах очистки.

Выбор хроматографической среды для ИОХ
Для большинства процедур очистки, особенно если характеристики образца неизвестны, на первых этапах разработки метода рекомендуется начать с сильного ионообменника, действующего в широком диапазоне рН.

• Сильные ионообменники: Q (анионные), S или SP (катионные) полностью заряжены в широком диапазоне рН.
• Слабые ионообменники: DEAE, ANX (анионные) и CM (катионные) полностью заряжены в узком диапазоне pH (рН 2–9 и pH 6–10 соответственно), но характеризуются переменной избирательностью в процессе разделения.

Предупакованные колонки, например HiTrap или HiScreen, не только более удобны в использовании, но также позволяют сэкономить время на оптимизацию метода, поскольку поставляются с подробными инструкциями, позволяющими получить воспроизводимые результаты.