Афинная хроматография

Аффинная хроматография (АХ)
АХ представляет собой метод разделения белков, основанный на обратимом взаимодействии белка (или группы белков) со специфическим лигандом, закрепленным на хроматографической матрице. Для АХ необходимо обратимое связывание белка-мишени и лиганда.

Образец наносится в условиях, благоприятствующих связыванию с лигандом. Несвязанный материал вымывается, а для выведения целевого белка меняют условия на такие, которые благоприятствуют элюции. Элюция проводится специфически, с применением конкурентного лиганда, или неспецифически — посредством изменения рН и/или ионной силы. Как вариант, элюция целевого белка может быть выполнена посредством удаления аффинного маркера. Белок в процессе связывания концентрируется. Затем проводится сбор очищенного концентрированного белка. Как вариант, элюция целевого белка может быть выполнена посредством удаления аффинного маркера.

Выбор среды для АХ
Наиболее простым решением является предварительная иммобилизация лиганда на матрице.
Если лиганд есть в наличии, но требуется его иммобилизация на предварительно активированной матрице, необходимые сведения представлены в руководстве GE Healthcare «Аффинная хроматография: принципы и методы».

Если нет подходящего лиганда, решите, целесообразно ли получать лиганд и разрабатывать специальную аффинную среду. Во многих случаях проще совместить альтернативные методики очистки, например ИОХ и/или ХГВ.